· PolyacrylamidGel muss aus Acrylamidmonomer, Polymerisatiounsausgangsmaterial, Katalysator, an dem richtege Salz- a Puffermëschung zesummen.
· Acrylamidan BIS (N,N'-Methylen-Duebelacrylamid) ass d'Monomerform-Gelmatrix.
· Ammoniumpersulfat-Startpolymerisatiounsprozess fir Klebstoff. D'Formuléierung vum Klebstoff erfuerdert eng 10% Ammoniumpersulfat-Léisung, déi a Waasser virbereet gëtt. Déi meescht Informatiounen hunn op eng Noutwennegkeet fir aktiv Notzung higewisen. Wéi och ëmmer, kann d'10% Léisung fir e puer Wochen bei 4℃ ouni bedeitende Verloscht vun Aktivitéit placéiert ginn. Fëllt bis zu 10 ml op a geheien ewech, wann de Klebstoff net méi aggregéiert.
Tipp: De Prozentsaz vunAcrylamidBeim Sequenzéiere sinn Klebstoff a Proteinklebstoff net datselwecht. Wann Dir virbereet Acrylamid: BIS-Léisung benotzt, gitt sécher datt Dir déi richteg Fläsch kritt.
· TEMED (N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin) ass e Katalysator, an enger bronger Fläsch, déi am Frigo gestallt gëtt. Gëtt kuerz virum Aufgiessen vum Klebstoff bäigefüügt.
· Polyacrylamidelektrophorese, dat bei der Elektrophorese benotzt gëtt, soll virun an no all Kéier gewäsch ginn. No der Elektrophorese mat enger mëller Biischt an engem Stoff a waarmem Seefewaasser wäschen, mat destilléiertem Waasser ofspullen a loossen dréchnen.
· Fiichtegkeet a Stëbs kënne mat huelem Polymer verursaachen. Virun der Elektrophorese, botzt d'Glasplack mat Glasreiniger a wëscht se mat enger mëller Biischt of. Wäscht mat destilléiertem Waasser a dréchent grëndlech mat engem Pabeiertuch. Spullen mat 70% Ethanol virum Ofwëschen mat Pabeier hëlleft ze botzen an d'Dréchnung ze beschleunegen. Füügt Proben vun Acrylamid hannereneen derbäi: BIS, Waasser, Pufferléisung, Ammoniumpersulfat, TEMED. Gutt schëdden an direkt ofgiessen.
Et ass net néideg, Polyacrylamid virun der Polymerisatioun ze entgasen. (Acrylamid gouf fréier an e Vakuum gesat fir Blasen ze entfernen, well Sauerstoff d'Polymerisatioun hemmt.)
Horizontal Klebpunkt Beispillspëtzen.
· Leet e Stéck schwaarzt Pabeier an déi ënnescht Këscht, mat engem schwaarzen Hannergrond fir e Lach am Prouf ze maachen, fir datt een et besser gesäit.
· Mat engem Klebstofftank gefëllte Puffer, just iwwer dem Kolloid.
· Wann de Rand e Liicht huet, maacht d'Luuchten un, loosst d'Liicht kolloid schéngen. Zitt d'Prouf an d'Pipette.
· mat Hëllef vun engem automateschen Pipettéierungsapparat.
· An 10-200 μ1 kann e flëssege Beweegungspunkt an de meeschte Punkten op der Prouf benotzt ginn. Fir ganz kleng Prouflächer (manner wéi 10μ1) ass de laange Pipettkapp, deen fir Sequenzéierungsklebstoff benotzt gëtt, méi praktesch.
· Pipettéierung just an der Prouf ënnergetaucht, lues fléissend Flëssegkeet inhaléieren. D'Prouf kann duerch Glycerin plakeg ausgesinn, a séier Pompelen kann Loftblosen an de Pipettkapp zéien.
· Nodeems de Pipettekapp ageootmet ass, beweegt de Flëssegkeetskopf sanft um Rand vum Päif oder zitt e Wëschpabeier de Flëssegkeetskopf ausserhalb vun den Drëpsen. Passt op, datt d'Prouf net agesaugt gëtt.
Setzt d'Prouf an d'Prouflach
· Pipettéierungsapparat fir e bëssen Drock ze halen, sou datt d'Prouwe liicht beweegt ginn an de Flëssegkeetskopf iwwerlafen.
· De Pipettéierkapp, deen an de Puffer agefouert gëtt, e bësse méi héich wéi d'Lächer, hält e positiven Drock. D'Spëtzt vun der Pipett kann an e klengt Lach agefouert ginn.
· lues a lues d'Prouwe erauszéien. D'Pipettespëtz gëtt iwwer dem Punktprouflach placéiert, an d'Prouf wäert an d'Lach ënnergoen. Loosst d'Prouf ënnergoen fir d'Prouflach ze fëllen anstatt eran ze drécken.
· Soubal den leschten Drëps vun der Prouf mam Flëssegkeetskapp eriwwer ass, beweegt sech d'Flëssegkeet op dat zweet Been, hieft d'Flëssegkeet lues a lues erop a beweegt sech aus dem Puffer eraus.
Wéi eng vertikal Klebstoffprobe maachen?
· vertikal Lächer fir d'Prouf um Klebpunkt, déi tëscht zwou Stécker Glas geformt ginn. Bei ganz dënnem Klebstoff kann de Pipettkapp net emol tëscht zwou Glasplacke agefouert ginn. Passt op de Glycerin op! Setzt de Pipettkapp iwwer d'Prouflach an d'Prouf wäert an d'Lach ënnergoen.
· Punktprouf virdrun, gitt sécher datt de vertikale Punkt vum Polypropylen-Acylgel-Prouflach propper gespullt gëtt. Spült den onpolymeriséierten Acrylamid an d'Waasser ewech, dat um Buedem vum Prouflach erschénge kann. D'Waasser kann d'Prouflach däitlech méi kleng maachen. Benotzt eng 25ml oder 50ml Sprëtz an eng 18-Gauge-Nol. Gidd den Elektrophorese-Puffer eran a spült d'Prouflach virsiichteg of.
· Et kann schwéier sinn, d'Lach an der Prouf ze gesinn, awer gläichzäiteg ass de Rescht einfach. Wann et ze vill Lächer gëtt, kann de Proufpuffer mat Bromphenolblo getest ginn.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 31. Mäerz 2023