· polyacrylamidgelies muss duerch acrylamide monomer, polymerization Startmaterial, Katalysator, an d'Recht vun Salz a Prellbock Mëschung zesummen.
· Acrylamida BIS (N, N'- Methylen-Doppelacrylamid) ass d'Monomer Form Gel Matrix.
· Ammoniumpersulfat ufänken Kliewefolie polymerization Prozess. D'Formuléierung vum Klebstoff erfuerdert 10% Ammoniumpersulfat-Léisung, déi am Waasser preparéiert ass. Déi meescht Informatioun huet e Besoin fir aktiv Notzung uginn. Wéi och ëmmer, d'10% Léisung kann e puer Woche bei 4 ℃ plazéiert ginn ouni bedeitend Aktivitéitsverloscht. Maacht bis zu 10 ml a werfen wann de Klebstoff net aggregéiert.
Rotschléi: De Prozentsaz vunAcrylamidan der Sequenzéierung vu Klebstoff a Proteinkleb ass net datselwecht. Wann Dir premade Acrylamid benotzt: BIS Léisung, gitt sécher datt Dir déi richteg Fläsch kritt.
· TEMED (N, N, N ', N'- tetramethylethylenediamin) ass e Katalysator, an enger bronger Fläsch, an de Frigo gesat. Füügt just virum Klebstoff.
· polyacrylamide electrophoresis benotzt Glas an electrophoresis soll virun an no all Kéier gewäsch ginn. No der Elektrophorese, wäscht mat engem mëllen Pinsel a Stoff a waarme Seifewaasser, spull mat destilléiert Waasser a stoe fir ze dréchen.
· Feuchtigkeit a Stëbs kënne mat huel Polymer verursaachen. Virun der Elektrophorese botzt d'Glasplack mat Glasreiniger a wëschen se mat enger mëller Pinsel. Wäscht mat destilléiertem Waasser a trocken grëndlech mat engem Pabeierwësch. Spülen mat 70% Ethanol ier Dir mat Pabeier wëschen hëlleft fir d'Trocknung ze botzen an ze beschleunegen. Füügt Proben vun Acrylamid successiv: BIS, Waasser, Pufferléisung, Ammoniumpersulfat, TEMED. Schütt gutt a schëdden direkt.
Et ass net néideg fir Polyacrylamid virun der Polymeriséierung ze entgasen. (Acrylamid gouf an engem Vakuum gesat fir Blasen ze entfernen well Sauerstoff d'Polymeriséierung hemmt.)
Horizontal gekollt Punkt Prouf Tipps.
· e Stéck schwaarz Pabeier an der ënneschter Këscht setzen, schwaarzen Hannergrond fir e puer Probe Lach ze maachen fir méi kloer ze gesinn.
· gekollt Tank gefëllt Puffer, just iwwer de kolloid.
· wann de Rand e Liicht huet, schalt d'Luuchten un, léisst d'Liicht kolloid schéngen. Zeechnen d'Probe an d'Pipette.
· benotzt automatesch Pipetting Apparat.
· an 10-200 mu 1 Flëssegket Plënneren Punkt kann am meeschte vun de Punkten op der Prouf benotzt ginn. Fir ganz kleng Probe Lächer (manner wéi 10μ1), ass de laange Pipettekop dee fir d'Sequenzéierungskleim benotzt gëtt méi bequem.
· Pipetting just an der Probe gedaucht, a lues bewegt Flëssegkeet inhaléiert. D'Probe kann plakeg mat Glycerin schéngen, a séier Pompel kann Loftblasen an de Pipettekopf zéien.
· Echantillon no Inhalatioun Pipetting Kapp, wäert bewegen Flëssegket Kapp sanft op de Rand vun der Päif oder wëschen Pabeier Saugen Flëssegket Kapp ausserhalb vun der droplets. Opgepasst net d'Probe ze suckelen.
Setzt d'Probe an d'Probe Lach
· Pipetting Apparat fir e bëssen Drock ze halen, maachen d'Proben liicht iwwerflësseg Flëssegkapp bewegen.
· de Pipetteskop, deen an de Puffer gesat gëtt, liicht méi héich wéi d'Plaze Lächer, behalen positiven Drock. Den Tipp vun der Pipette kann an e klengt Lach agefouert ginn.
· lues a stänneg d'Proben eraus. De Pipette-Spëtzt gëtt iwwer dem Punktprobe Lach gesat, an d'Probe wäert an d'Lach ënnergoen. Loosst d'Probe ënnerzegoen fir d'Probeloch ze fëllen anstatt eran ze drécken.
· eemol de leschte Tropfen vun der Probe mat flëssege Kapp, wäert d'Flëssegkeet op den zweete Been réckelen, lues d'Flëssegbeweegung erhéijen, aus dem Puffer réckelen
Wéi maachen ech vertikale Klebeprobe?
· vertikal gekollt Punkt Prouf Lächer tëscht zwee Stécker vun Glas geformt. A ganz dënnen Klebstoff kann de Pipettekop net emol tëscht zwou Glasplacke agesat ginn. Kuckt de Glycerin! Setzt de Pipette Kapp iwwer d'Probe Lach an d'Probe wäert an d'Lach ënnerzegoen.
· Punkt Prouf virun, ginn sécher de vertikalen Punkt vun polypropylene acyl gelies Prouf Lach rinsed propper ze setzen. Wäscht den onpolymeriséierten Acrylamid an d'Waasser dat um Enn vum Probe Lach erscheint. D'Waasser kann d'Prouf Lach däitlech méi kleng maachen. Benotzt eng 25ml oder 50ml Sprëtz an eng 18-gauge Nadel. Gitt den Elektrophorese-Puffer an a spült d'Probe Lach virsiichteg.
· et kann schwéier sinn d'Probe Lach ze gesinn, awer gläichzäiteg ass de Rescht einfach. Wann et iwwerschësseg Lächer gëtt, kann de Probebuffer mat Bromophenolblo getest ginn.
Post Zäit: Mar-31-2023